Stem Cells en EP

Generación de células madre pluripontenciales isogénicas en mutaciones de EP de inicio temprano

Con el uso de la combinación de nucleasa de dedos de zinc y células madre pluripotenciales isogénicas inducidas, se ha podido controlar el ambiente genético de desarrollo de diversos experimentos, como el estudio a presentarse a continuación.

Controlándose a las células madre pluripotenciales con la consiguiente modificación en la producción de alfa-sinucleína (gen A53T).

Fig.1 Células madre isogénicas, presentando patrones de control

Las líneas de células madre son electroporadas con dedos de zinc y un vector que expresa eGFP. Se introduce E46K/G188A en el exón 3 de alfa-sinucleína, con ayuda de oligodesoxinucleótidos monocatenarios, para revisar si el proceso ha sido llevado a cabo con éxito se utiliza PCR y Southern Blot, como prueba confirmatoria tenemos una secuenciación que revela óptimos resultados ya que se introdujo correctamente la secuencia y no hubo ningún otro tipo de expresión anómala asociada.

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Soldner, F.; Laganière, J.; Cheng, A.; Hockemeyer, D.; Gao, Q.; Alagappan, R.; Khuruana, V.; Golbe, L.; Myers, R.; Lindquist, S.; Zhang, L.; Guschin, D.; Fong, L.; Vu, J.; Meng, X.; Urnov, F.; Gregory, P.; Zhang, S.; Jaenisch, R. (2011). Generation of isogenic pluripotent stem cells differing exclusively at two early onset Parkinson point mutations. Cell Journal, vol 146, issue 2, p 318-331. Taken from: DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2011.06.019